1、樣品預處理方法
樣品預處理應包括進樣前的一切操作。除了稱重、溶解、稀釋等步驟外,樣品需要: ①過濾; ②萃取; ③衍生化(柱前衍生) ; ④液相色譜(低壓柱層析) 。這些操作可以是手工進行或實行自動化操作。樣品預處理的目的是除去幹擾物、增加檢測器靈敏度(富集) 、保護色譜柱等。樣品預處理同時也是為(wei) 了避免色譜分離故障,其中樣品萃取是關(guan) 鍵的一步,要從(cong) 大量的幹擾物中萃取出微量組分難度極大。
有些樣品經預處理後還不能作進樣分析,需進行衍生化處理,使一些無紫外吸收或無熒光的組分,經過衍生化後能用紫外和熒光檢測器檢測,這樣既提高了靈敏度,又改善了分離度(質量變化) 。樣品預處理的同時也會(hui) 帶來一些問題,如樣品損失、樣品被汙染、衍生化反映不完全或多種反應物生成等。衍生反應常會(hui) 影響試驗的精確度,或者在整個(ge) 樣品預處理過程中帶來誤差。
用於(yu) 液相色譜分析的樣品溶液必須均勻而無顆粒,有顆粒會(hui) 損壞進樣器並阻塞柱頭。處理好的樣品在準備上柱前應對準光線搖動,檢查樣品溶液中有無顆粒。隻要看到顆粒、混濁或乳化,就應過濾一下,過濾膜要能截留住015μm 以上的顆粒,樣品過濾的過程中可能引起:樣品被汙染,因過濾吸附降低樣品組分的含量,樣品溶劑揮發引起誤差。萃取的目的是從(cong) 共溶的樣品介質中分離出被分析的組分,或者減少損壞柱的物質(如蛋白質等)和幹擾物。一般采用有機溶劑萃取,要求萃取用的溶劑毒性低、揮發性好、雜質少、對待測樣品有良好的溶解度且又與(yu) 水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者兩(liang) 種以上的混合溶劑。萃取後一般可直接進樣,有時需要濃縮或吹幹濃縮,再用定體(ti) 積的液體(ti) 或流動相溶解進樣。這樣增加了樣品濃度,提高了靈敏度,同時避免了溶劑峰對樣品峰的幹擾。在萃取是要考慮樣品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性組分外,還有用脂溶性的組分製成水溶性的鹽。萃取方法如下:
1.1 水溶性樣品
(1) 酸性組分及生成的鹽萃取方法:有機溶劑萃取雜質後調成酸性,再加有機溶劑萃取或進樣,或在N2 流下吹幹,用適當的溶劑解後進樣。
(2) 堿性組分及生成的鹽萃取方法:有機溶劑萃取雜質後調成堿性,再加有機溶劑萃取或進樣,或在N2 流下吹幹,用適當的溶劑溶解後進樣。
(3) 中性組分萃取方法:有機溶劑萃取雜質後,直接用反相色譜法分析。
1.2 脂溶性組分萃取方法:
有機溶劑萃取或進樣,或在N2 流下吹幹,用適當的溶劑溶解後進樣。
2 分析中的汙染
一般檢測的環境、容器、試劑都是影響測定結果的因素。
2.1 環境汙染
儀(yi) 器室的有害氣體(ti) 、氣溶液、灰塵等等都能造成汙染,影響檢測結果,這種汙染很難校正。因此,儀(yi) 器室與(yu) 其他實驗室應隔離,保持清潔,儀(yi) 器室內(nei) 應安裝空調,注意防潮、防腐、防震、空氣相對濕度應小於(yu) 70 %為(wei) 宜。
2.2 容器
實驗室常用的器皿有玻璃類、瓷類、石英類、塑料類等,在進行分析時,應按照待則樣品的要求來選則器皿,不管使用哪種器皿,容器的洗條清潔都是很重要的,也是取得好的檢測結果的基本保證。
2.3 試劑
在液相色譜分析中,所選用的試劑必須是色譜純、優(you) 級純或分析純,如果用含量有雜質的試劑,則會(hui) 出現雜峰而影響測定結果。
3 標準溶液的配置
在配置標準溶液時,先要配置現定濃度的內(nei) 標溶液,在標準溶液和樣品溶液中最好使用同一批次配製的內(nei) 標溶液以減少誤差。
(1) 配製標準溶液的物質應當是色譜純的、性質穩定。
(2) 常用的標準溶液應存放在棕色溶液瓶中低溫保存。
(3) 在配製維生素類標準品時,要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。
4 樣品預處理過程中的主要故障與(yu) 解決(jue) 辦法
(1) 色譜圖中出現無關(guan) 的峰,原因有可能是樣品過濾器帶來汙染,解決(jue) 方法如下:
①將過濾器浸泡在樣品溶劑中並進樣試驗; ②改變過濾器類型; ③采用交替清洗技術。
(2) 一些或全部化合物的峰比預期的小,尤其是低濃度的樣品,原因可能是樣品過濾器表麵吸附下降,解決(jue) 方法如下:①改變過濾器類型; ②嚴(yan) 格按相同條件處理所用樣品; ③采用交替清洗技術。
(3) 回收率太低或差,原因可能是萃取不完全,解決(jue) 方法如下:①增加萃取時間,使用熱溶劑; ②修改清洗方法。
(4) 色譜峰變寬,柱壽命縮短,原因可能是樣品帶來的幹擾與(yu) 汙染,應改進清洗方法。
(5) 精度差,原因可能是回收不完全,解決(jue) 方法如下:
①改進或替換衍生化、分離、萃取或其他條件;
②用自動化處理裝置提高精度。